[問題] 有人做過gelatin zymography嗎???

看板Biotech作者 (Mars)時間17年前 (2007/08/09 12:19), 編輯推噓3(303)
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嗯.... 有點不知該怎麼問 有人做過gelatin zymography嗎?? 最近實驗室再做這個 但是為了處理sample 所以SAMPLE沒用beta-mercaptol ethanol處理 問題來嘍 就是正常的gel跑出來 染色 會有兩條bend (一條是MMP9 一條是MMP2) 正常來說應該整片gel都是藍的很均勻的 但是跑出來染完色後 會發現那片gel上半部顏色會比較淺 就是 ██████████ ██████████ ◢███ 就是這邊變比較淡 ███▇██▇███ ◥███ ███▇██▇█████████████ 想在問一下喔 就是在72kd~92kd那兩條bend之間 還有好多好小好小細細的bend 想問一下這兩個問題是為什麼啊???有人知道嗎????? 感謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.68.244 ※ 編輯: ariesmars 來自: 140.128.68.244 (08/09 12:22) ※ 編輯: ariesmars 來自: 140.128.68.244 (08/09 12:22) ※ 編輯: ariesmars 來自: 140.128.68.244 (08/09 12:24) ※ 編輯: ariesmars 來自: 140.128.68.244 (08/09 12:29)

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你有把上層膠切掉嗎? 你電壓多少?跑多久?
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分上下兩半我以前也碰過,最後發現是running buffer不fresh
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第二個問題我沒碰過,如果要我猜一下的話有可能是其他MMP
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或是膠聚合不好造成的拖曳
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中間的部分一班認為是active form 的gelatinase (MMP-9)
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空白處可能是gelatin跑掉了..交的%數根電壓數都會影響
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文章代碼(AID): #16kfNVFl (Biotech)