[求救] 請問protein expression的a.a 片段大小

看板Biotech作者 (whatever)時間14年前 (2010/01/25 17:05), 編輯推噓3(301)
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各位大大好, 小弟目前實驗遇到一個問題,就是用 E.coli 表現蛋白質是否蛋白質的大小不能太小? 我預計請廠商幫我合DNA template, 我在用pQE30帶到JM109裡。之後在轉到M15大量 表現。 現在的問題是我的東西只有16個a.a,如果template設計成48個nucleotide那表現出來 也只有16個a.a.,會不會無法expression? 我現在的想法是在每16個a.a 的nucleotide sequence中墊一個phenylalanine, 然後做 三重複---> 48-F-48-F-48, F代表phenylalanine的3個nucleotide。 這樣應該peptide大小不會太小,然後表現之後再用chymotrypsin切F的位置,就有很多 獨立的目標peptide了。 這個方法主要的問題是template會有很多個nucleotide, 合成template的價錢又是 $18*nucleotides+$350(purify/strand), 算起來一條要2996, 那豈不是template 就要幾十萬? 所以小弟小要請教各位大大是否16個mer的peptide就可以表現了,還是有更好的方法 來得到我的peptide? (p.s. 不考慮直接和成peptide不然我的論文就沒料了) 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.51.248

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把你想的方法用PCR-based amplify 可以省很多錢
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我表現46AA OK!16AA沒試過不知道 不過只要是屬於正常的ORF
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(open reading frame)內的話應該是可以吧(可以問問看廠商)
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試試看pET31 是peptide expression system
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文章代碼(AID): #1BNLx4Q9 (Biotech)