[求救] RNA抽取問題

看板Biotech作者 (寶)時間10年前 (2013/11/27 14:33), 編輯推噓5(5推 0噓 19→)
留言24則, 8人參與, 最新討論串1/1
請問一下大家在RNA isopropanol沉澱的時候 離完心會發生pallet變一大片的情形嗎?? 在eppendorf中不是形成塊狀的沉澱 而是分散的情況??? 想請問可能是前面哪個步驟出錯了 流程 trizol 1ml 5min 200ul chloroform mix 靜置3 min 取上清液與isopropanol 1:1 mix -20度C 1hr後離心 12000rpm 15min -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.90.92
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po個圖來吧
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推
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有時候你的細胞數太少,收到的RNA就更少,所以異丙醇
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離心完很可能看不到明顯的沉澱物,做法是直接用倒掉上
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清液的方式,慢慢倒,底下會有一小團透明狀,流動性較低
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那個就是RNA
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其實快快倒也不會不見 慢慢倒還怕他會飄起來
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推
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你chloroform靜置完後有離心嗎?應該要12000rpm離心後，
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取上清液，再加入isopropanol
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有離心~ 但是完全沒看到透明狀，加了酒精後還有點黃黃的
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補上照片 不過不知道清不清楚> <
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推
11/28 11:58, , 12F
我說的離心是在你加入chloroform之後喔，不是加isopropanol
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因為照片上看到的是你加入isopropanol離心過後的樣子
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你原文的步驟中在加入chloroform靜置3分鐘後就直接取上清液
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如果你一切的步驟都正確，那就可能是你的細胞量太多。
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最後建議你要帶手套拿管子，畢竟是做RNA的實驗，小心一點好
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不過你的指甲套很可愛就是了....
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真的要戴手套...不只是保護RNA也保護自己..不要沾到有機溶劑
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步驟是我忘了寫上! 加完chloform後有離心~
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細胞太多管壁會有這種現象嗎?? 但沉澱出的pallet很小耶~
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只是為了拍照方便,在操作的時候還是都有戴手套的 XD
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isop後離30min看看
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推
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操作RNA請全程戴手套+口罩~必要時請噴酒精
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推
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我也看過分散在管壁上，結果品質莫名其妙的好
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