Re: [問題] Ligation失敗(已看過精華區)

看板Biotech作者aggaci (有氣質的台客)時間18年前 (2006/05/11 13:10)推噓5(5推 0噓 2→)

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※ 引述《ctlee (寧靜小城)》之銘言： : 請問各位高手 : 小弟現在要將3kb的PCR product接到一6.4kb的vector的Bgl II上 : 我先PCR amplify我的fragment : 純化後用Bgl II切再gel purify以去除nonspecific products : 至於vector, 我用Bgl II 切完純化後用CIAP做dephosphorylation : Ligation的時候insert:vector大約維持在5:1的比例 : 14 C overnight之後 transform到DH5alpha competent cells : 奇怪的是,我的control(無insert)沒有任何colony : 有insert的ligation 做transformation出來所得的clone全是self-ligation : 我實在無法解釋這個結果,難道insert會促進self-ligation嗎 : clone這個fragment好幾個月了都沒什麼進展,拜託各位幫忙了 pPCR product直接切可以以BglII來說，再primer設計上面得多延伸3個nucleotide才會比較好切 -- http://0rz.net/da0PG 我的相簿.... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165

推

shaline

05/11 13:47, , 1^F

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shaline

05/11 13:49, , 2^F

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yoknowme

05/11 23:02, , 3^F

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