Re: [問題] Real-time PCR
※ 引述《lakerjackt (NN )》之銘言：
: 哈....這是事實.....
: 我的cDNA目前真的PCR做的出來....用的primer還是用跨intron的...
: 但real-time就是做不出來....
: 所以我才頭大阿!!!
: (ABI廠商是說我cDNA沒轉好..但我cDNA就是有轉成功阿...
: 就一直說我的cDNA不夠純...所以請各位救救我
: ※ 引述《mandible (生化...go go go !!)》之銘言：
: : 你覺得pcr做的出來!q-pcr會做不出來嗎??
: : 那你可能有點誤導q-pcr的原理唷!
基本上,的確是PCR做的出來的,q-PCR也應該要看到結果
cDNA的純度真的很重要, 不只是在轉cDNA的過程
先前準備RNA的步驟也有很大的影響
尤其是處理酒精的步驟, 不夠乾淨俐落的話, 是會影響深遠的^^"
另外, 不知道你轉cDNA是用OligodT或是random hexmer呢?
這個對你要看的是什麼基因也會有影響
不過目前我覺得酒精去除的不夠乾淨應該是主要原因之一
你可能需要重新Isolate一次會比較好
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