Re: [求救]請問一下double digstion的問題! Orz
※ 引述《Nox4156 (人真好!)》之銘言：
: 各位大家好! 我有一個Vector和Insert DNA 都要用 XbaI 和 EcoRI 處理
: 但是NEB的Buffer推薦的是buffer 2，然後切出來後竟然會形成很多bands的情形出現!
: 但是後來我改用 EcoRI 的專用buffer切後一樣會切出很多條bands。
: 第一次酵素加 0.7μl 最後體積 50 μl處理3hr，
: 第二次酵素加 0.3μl 最後體積 20 μl處理overnight。
: 請問條件會有差嗎? (但是結果都切的亂七八糟!)
: 但是我之前以 EcoRI 和 XhoI 處理同樣的基因和vector切都沒問題耶~
: (用的是EcoRI 的專用buffer)
: 謝謝各位了!
你可以試試sequential切...先給XbaI, heat inactivation後再加入EcoRI
如果還是不行....
建議你換一管新的再試試.....XbaI,SpeI都是很難搞的restriction enzyme
很多怪現象會出現尤其是作double digection....
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