Re: [求救] PCR,以前做的出來,現在做不出來了?
※ 引述《yumei (愛自己最重要)》之銘言：
: 請教版上的PCR高手們,
: 我目前做的題目是關於細菌的基因,
: 我做的是陰性菌,目前在檢測細菌中是否帶有特定的基因,
: 這個實驗在今年二月做過一部份,結果良好,一切都沒問題,
: 因為之後收到更多的菌株,因此在九月時又重新進行此實驗
: 結果非常慘,再也跑不出來了!
: 連之前二月做的陽性菌株,現在也無法跑出我要的產物
: 原先懷疑是PCR的問題
: 所以目前試過3家dNTP,4家Taq,
: 調整過鎂離子濃渡由1.5mM試到2.5mM,結果連水都出現偽陽性
: 改變annealing的溫度下降2-4度
: 都無法再度amplify出正確產物,
: 後來又懷疑是否DNA有問題,
: 又重抽DNA兩三次
: (使用過phenol/chloroform/Isoamyl Alcohol的方法也試了用kit抽DNA)
: 還是沒辦法Orz
: 目前還沒試的,只剩下加DMSO了
: (等會就知道結果了T_T)
: 可是我二月時不加DMSO也可以跑出來呀~~~
: 有人可以再給我不同的建議嗎?
: 試了快兩個月了,再做不出來,我真的可以不用玩了Q_Q
聽你的敘述....我覺得是primer的問題....你當初有分裝嘛？
建議你再訂一次新的primer....稀釋後分裝...凍在-20度
一出現問題就換一管
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