Re: [求救] flow的一些小撇步!!
※ 引述《asthma (asthma)》之銘言：
: ※ 引述《ruthwu (Ruth)》之銘言：
: : 欲用flow來看細胞的apoptosis
: : 目前是用AnnexinV-PE & 7AAD進行雙染 (BD的apoptosis kit)
: : 有些部分想請問一下:
: : 1.收細胞前的wash,到底該用冰的PBS還是室溫的??
: 皆可
這邊我是用冰的...後來的步驟也會盡量維持低溫
: : 2.直接沖下??還是以EDTA沖下??
: ?
收細胞嗎?? 以不要對細胞產生傷害的方法最好
細胞的破損會讓染核酸的染劑失準
: : 3.resuspend cells in 1x binding buffer(是冰的還是室溫呢??)
: 你應該是用kit, 4度C 比較適合 因為下一個步驟是........
: : 在實驗中,control cell(without treatment)進行單染setting時
: : 發現Annexin positive細胞佔了50-60%
: : 同時7AAD positive細胞大約才20%
: : 感覺是Annexin signal超強
: 染7-AAD 跟 Annexin V 的意義不同, 你了解之後就會發覺原因了
: 你的結果很正常 ^^
我比較有疑問的是為啥使用control cell來進行單染
通常單染是為了進行校正 除非你的control cell是死很多的
否則一般來說應該會使用有處理的細胞進行單染
如果control cell會被染到這麼多 那cell可能不太健康吧
: : (1*10^5 cells/100ul+3ul dye)
: : 請教各位有經驗的大大,給予指點迷津吧!!
: : 感激不盡!!
: Good luck
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.208.3
推
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